Prática 3 - Extração de DNA da mucosa bucal

 Por: Milton Moraes/ adaptado por Blogger Porque sou diferente.

Boa noite biólogos, não biólogos e apaixonados pela biologia, hoje seguimos com mais uma prática que consiste na extração de DNA, porém desta vez é ainda mais curiosa por se tratar de uma prática feita com humanos. Como bons ( ou nem tanto) entendedores da biologia, sabemos nós que todo e quaisquer ser vivo possui DNA, o DNA é o que nós diferencia . Seguindo direitinho as indicações, ao final teremos mais um resultado que mostra por que somos tão APAIXONADOS pela biologia.

 segue:

1. Bochechar aproximadamente 10-15ml de água com açúcar (3%, uma colher de chá de açúcar em meio copo de requeijão. Uma quantidade maior de células pode ser obtida fazendo um raspado da mucosa com uma espátula de madeira).

2. Acondicione em um tubo cônico com tampa o volume obtido do bochecho (apenas 5ml) e adicione uma pitada de sal de cozinha (para aprox. 1% final).

3. Adicionar algumas gotas (5-10) de detergente diluído a 25% (1:4) e homogeneizar vagarosamente.

4. Aquecer a 55^oC  por 10 min. Resfriar 5 min no gelo.

5. Adicionar álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do copo lentamente, com o auxílio de uma colher de sopa, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura.

O DNA (massaroca esbranquiçada) deverá formar um aglomerado e subir.

  

Pronto, se você seguio direitinho ao final você pode verificar as moléculas de DNA ao topo do copo. Abaixo seguem mais algumas dicas e comparações  que você pode fazer com a extração  de DNA da mucosa oral e a extração em vegetais como por exemplo a cebola (postagem anterior).

Quais são as dicas do "Chef"?

Compare os dois métodos. Quais são as semelhanças e diferenças? Como esse processo funciona?

Como age o detergente?

O detergente dissolve lipídeos e proteínas rompendo a célula.

E a temperatura, o sal e o álcool?

A temperatura elevada (55ºC) inativa as DNAses (enzimas que degradam o DNA) e auxilia a dissolução da membrana celular.

O sal (NaCl) possibilita a precipitação dos ácidos nucleicos em solução alcoólica, porque ele bloqueia a eletronegatividade do esqueleto fosfato-açúcar e favorece a aglomeração das moléculas de DNA.

Como DNA não é solúvel em álcool, quando este é adicionado à mistura, todos os componentes da mistura, exceto o DNA, permanecem em solução, enquanto o DNA precipita na camada alcóolica.

Esperamos que tenham gostado da experiência.

Att, Blogger Porque sou diferente.

obs:

Os materiais utilizados podem ser perigosos se ingeridos e devem ser manuseados com extrema cautela. O álcool é inflamável e deve ser mantido longe do fogo.

Desenvolvida para o evento Genes no Parque, em comemoração aos 50 anos da descoberta da estrutura do DNA, a atividade DNA na Cozinha foi coordenada por Milton O. Moraes e contou com a participação inestimável de Alejandra N. Martinez, Cláudia F. Alves, Diogo Coutinho, Guilherme Mattos, Patrícia R. Vanderborght, Rocio Saavedro-Acero, Sidra E. Vasconcellos e Viviane M. Câmara. Todos os integrantes desenvolvem atividades de pesquisa no Laboratório de Hanseníase do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz. Os procedimentos foram desenvolvidos a partir de métodos do laboratório ou descritos por outros autores, segundo o livro Biologia Molecular na Prática Médica e Biológica, de Milton O. Moraes

Fonte: http://www.invivo.fiocruz.br